典型操作流程(以 SDS-PAGE 為例)
凝膠制備:根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)分子量配置凝膠(小分子用高濃度膠,如 15%;大分子用低濃度膠,如 8%),分為 “分離膠”(下層,起分離作用)和 “濃縮膠”(上層,使樣品濃縮成窄帶,提高分辨率)。
樣品處理:蛋白質(zhì)樣品與 SDS 上樣緩沖液(含 SDS、還原劑 β- 巰基乙醇、溴酚藍指示劑)混合,95℃加熱 5-10 分鐘,使蛋白質(zhì)變性并結(jié)合 SDS。
上樣與電泳:將處理好的樣品加入凝膠加樣孔,同時加入 “蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)品”(Marker),接通電源(濃縮膠用低電壓,分離膠用高電壓),溴酚藍指示劑遷移至凝膠底部時停止電泳。
檢測與分析:
染色:常用考馬斯亮藍染色(簡單快速,檢測限~0.1μg)或銀染(靈敏度高,檢測限~1ng);
成像與分析:通過凝膠成像儀拍攝條帶,結(jié)合 Marker 判斷目標(biāo)蛋白質(zhì)的分子量,通過條帶亮度半定量分析蛋白質(zhì)含量。
電泳加工的主要類型
根據(jù)涂料顆粒的帶電性質(zhì),電泳加工主要分為兩類,其技術(shù)特點和應(yīng)用場景差異顯著:
類型 涂料電荷 工件極性 核心優(yōu)勢 適用場景
陰極電泳(CED) 陽離子 陰極 1. 涂層耐腐蝕性極強(可通過鹽霧測試 1000 小時以上);
2. 泳透力高(復(fù)雜工件內(nèi)腔、縫隙也能均勻上漆);
3. 涂層均勻,無流掛、針孔缺陷 汽車車身及零部件(如車架、輪轂)、工程機械、高端五金件
陽極電泳(AED) 陰離子 陽極 1. 成本較低,工藝相對簡單;
2. 涂層色澤鮮艷,裝飾性好
預(yù)脫脂
目的:初步去除工件表面的大量油污、灰塵(尤其是機加工殘留的切削油、沖壓油)。
工藝:將工件浸入或噴淋堿性脫脂劑(含氫氧化鈉、碳酸鈉、表面活性劑等),溫度 50-60℃,時間 3-5 分鐘。
作用:減輕后續(xù)主脫脂的負擔(dān),避免油污污染后續(xù)槽液。
酸洗 / 除銹(針對鋼鐵工件)
目的:去除工件表面的氧化皮、鐵銹及金屬毛刺。
工藝:浸入鹽酸(5%-10%)或硫酸(8%-15%)溶液,溫度 20-40℃,時間 3-8 分鐘。
關(guān)鍵:需添加緩蝕劑(如烏洛托品),防止金屬過腐蝕導(dǎo)致表面粗糙;無銹工件可跳過此步驟。