電泳(Electrophoresis)是一種利用帶電粒子在電場(chǎng)中定向移動(dòng)的特性,實(shí)現(xiàn)混合物中不同成分分離、分析或純化的核心技術(shù),廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。其本質(zhì)是 “電荷差異” 與 “電場(chǎng)力” 共同作用的結(jié)果 —— 不同物質(zhì)因帶電性質(zhì)、分子大小、形狀不同,在電場(chǎng)中的遷移速度存在差異,終實(shí)現(xiàn)分離。
電泳的分離核心依賴遷移率(Mobility, μ) —— 即帶電粒子在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的移動(dòng)速度,其大小由粒子自身性質(zhì)和環(huán)境因素共同決定:
影響因素 具體作用
粒子自身性質(zhì) 1. 電荷量:電荷越多,電場(chǎng)力越大,遷移越快(如 DNA 帶負(fù)電,電荷量隨片段長(zhǎng)度增加而增多);
2. 分子大?。悍肿釉叫。橘|(zhì)阻力越小,遷移越快(如小分子蛋白質(zhì)比大分子蛋白質(zhì)遷移快);
3. 分子形狀:球形分子比線性 / 不規(guī)則分子阻力小,遷移更快(如球狀蛋白>纖維狀蛋白)。
外部環(huán)境因素 1. 電場(chǎng)強(qiáng)度:電壓越高,電場(chǎng)力越強(qiáng),遷移越快(需平衡速度與分辨率,電壓過(guò)高易導(dǎo)致發(fā)熱);
2. 緩沖液:提供穩(wěn)定 pH(維持粒子帶電狀態(tài))和離子強(qiáng)度(影響電場(chǎng)傳導(dǎo)與粒子穩(wěn)定性);
3. 支持介質(zhì):如凝膠、濾紙等,通過(guò)孔徑大小 “篩選” 不同分子(核心作用,如瓊脂糖凝膠的多孔結(jié)構(gòu))。
瓊脂糖凝膠電泳(Agarose Gel Electrophoresis)
支持介質(zhì):瓊脂糖(從海藻中提取的多糖,加熱溶解后冷卻形成多孔凝膠)。
核心特點(diǎn):孔徑較大(50-200nm)、操作簡(jiǎn)單、分辨率適中、成本低。
適用對(duì)象:大分子物質(zhì),如核酸(DNA/RNA)(常用 1%-2% 瓊脂糖凝膠分離 100bp-50kb 的 DNA 片段)、大型蛋白質(zhì)復(fù)合物。
典型應(yīng)用:
DNA 片段分離(如 PCR 產(chǎn)物鑒定、酶切片段分析);
核酸純化(切膠回收目標(biāo) DNA 片段);
瓊脂糖凝膠電泳結(jié)合 EB(溴化乙錠,已逐步被更的 SYBR Green 替代)染色,可直觀觀察核酸條帶。
主要局限性
設(shè)備投資高:需建設(shè)電泳槽、超濾系統(tǒng)、高溫固化爐等專用設(shè)備,初期投入較大(中小型生產(chǎn)線投資通常超百萬(wàn))。
顏色局限性:常規(guī)電泳涂料以黑色、灰色為主,彩色電泳技術(shù)難度高、成本高(需專用色漿,且顏色穩(wěn)定性難控制)。
工件材質(zhì)限制:主要適用于金屬工件(如鋼鐵、鋁合金),非金屬工件(如塑料、木材)需先進(jìn)行導(dǎo)電處理(如鍍膜),工藝復(fù)雜。