電泳(Electrophoresis)是一種利用帶電粒子在電場中定向移動的特性,實現(xiàn)混合物中不同成分分離、分析或純化的核心技術(shù),廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗、材料科學(xué)等領(lǐng)域。其本質(zhì)是 “電荷差異” 與 “電場力” 共同作用的結(jié)果 —— 不同物質(zhì)因帶電性質(zhì)、分子大小、形狀不同,在電場中的遷移速度存在差異,終實現(xiàn)分離。
典型操作流程(以 SDS-PAGE 為例)
凝膠制備:根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)分子量配置凝膠(小分子用高濃度膠,如 15%;大分子用低濃度膠,如 8%),分為 “分離膠”(下層,起分離作用)和 “濃縮膠”(上層,使樣品濃縮成窄帶,提高分辨率)。
樣品處理:蛋白質(zhì)樣品與 SDS 上樣緩沖液(含 SDS、還原劑 β- 巰基乙醇、溴酚藍(lán)指示劑)混合,95℃加熱 5-10 分鐘,使蛋白質(zhì)變性并結(jié)合 SDS。
上樣與電泳:將處理好的樣品加入凝膠加樣孔,同時加入 “蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)品”(Marker),接通電源(濃縮膠用低電壓,分離膠用高電壓),溴酚藍(lán)指示劑遷移至凝膠底部時停止電泳。
檢測與分析:
染色:常用考馬斯亮藍(lán)染色(簡單快速,檢測限~0.1μg)或銀染(靈敏度高,檢測限~1ng);
成像與分析:通過凝膠成像儀拍攝條帶,結(jié)合 Marker 判斷目標(biāo)蛋白質(zhì)的分子量,通過條帶亮度半定量分析蛋白質(zhì)含量。
關(guān)鍵應(yīng)用領(lǐng)域
電泳技術(shù)是生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)的 “基礎(chǔ)工具”,核心應(yīng)用包括:
分子生物學(xué):DNA/RNA 分離、鑒定、純化(如 PCR 產(chǎn)物驗證、基因克隆中的酶切分析)、核酸測序(毛細(xì)管電泳為核心技術(shù)之一)。
蛋白質(zhì)研究:蛋白質(zhì)分子量測定、純度分析、表達(dá)量檢測(如 Western Blot 前的樣品驗證)、蛋白質(zhì)復(fù)合物分離。
醫(yī)學(xué)檢驗:臨床診斷(如血清蛋白電泳檢測肝病、腎病,血紅蛋白電泳篩查地中海貧血)、病原體檢測(如病毒核酸電泳鑒定)。
食品與環(huán)境:食品中過敏原(如大豆蛋白、乳蛋白)檢測、環(huán)境污染物(如重金屬離子、農(nóng)藥殘留)分析。
電泳加工的核心原理
電泳涂裝基于 “電泳、電沉積、電滲、電解” 四大電化學(xué)過程,具體流程如下:
電泳:將工件(作為陰極或陽極)與對應(yīng)的電極板放入含有帶電涂料顆粒(如陽離子樹脂、顏料)的電泳槽中,通直流電后,涂料顆粒因電荷作用向工件表面定向移動。
電沉積:涂料顆粒到達(dá)工件表面后,因電場作用發(fā)生電化學(xué)反應(yīng)(如中和、交聯(lián)),逐漸沉積形成不溶于水的薄膜。
電滲:沉積過程中,涂層內(nèi)部的水分在電場作用下向槽液中遷移,使涂層逐漸致密、干燥。
電解:水在電極表面發(fā)生電解反應(yīng)(陰極產(chǎn)氫氣、陽極產(chǎn)氧氣),此過程需通過工藝控制避免氣泡影響涂層質(zhì)量。