電泳(Electrophoresis)是一種利用帶電粒子在電場中定向移動(dòng)的特性,實(shí)現(xiàn)混合物中不同成分分離、分析或純化的核心技術(shù),廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、材料科學(xué)等領(lǐng)域。其本質(zhì)是 “電荷差異” 與 “電場力” 共同作用的結(jié)果 —— 不同物質(zhì)因帶電性質(zhì)、分子大小、形狀不同,在電場中的遷移速度存在差異,終實(shí)現(xiàn)分離。
瓊脂糖凝膠電泳(Agarose Gel Electrophoresis)
支持介質(zhì):瓊脂糖(從海藻中提取的多糖,加熱溶解后冷卻形成多孔凝膠)。
核心特點(diǎn):孔徑較大(50-200nm)、操作簡單、分辨率適中、成本低。
適用對(duì)象:大分子物質(zhì),如核酸(DNA/RNA)(常用 1%-2% 瓊脂糖凝膠分離 100bp-50kb 的 DNA 片段)、大型蛋白質(zhì)復(fù)合物。
典型應(yīng)用:
DNA 片段分離(如 PCR 產(chǎn)物鑒定、酶切片段分析);
核酸純化(切膠回收目標(biāo) DNA 片段);
瓊脂糖凝膠電泳結(jié)合 EB(溴化乙錠,已逐步被更的 SYBR Green 替代)染色,可直觀觀察核酸條帶。
后處理(保證涂層性能穩(wěn)定)
烘干固化:將工件放入高溫烘箱,按涂料要求控制溫度(陰極電泳 160-180℃,陽極電泳 140-160℃)和時(shí)間(20-40 分鐘),使涂層交聯(lián)固化,形成終的機(jī)械性能和耐腐蝕性(固化參數(shù)直接影響涂層硬度、附著力)。
冷卻檢驗(yàn):工件自然冷卻后,檢測涂層外觀(無流掛、針孔、色差)、厚度(用膜厚儀測量)、附著力(劃格法測試,需達(dá)到 GB/T 9286 標(biāo)準(zhǔn) 0 級(jí)或 1 級(jí))、耐腐蝕性(鹽霧測試、耐溶劑測試)。
酸洗 / 除銹(針對(duì)鋼鐵工件)
目的:去除工件表面的氧化皮、鐵銹及金屬毛刺。
工藝:浸入鹽酸(5%-10%)或硫酸(8%-15%)溶液,溫度 20-40℃,時(shí)間 3-8 分鐘。
關(guān)鍵:需添加緩蝕劑(如烏洛托品),防止金屬過腐蝕導(dǎo)致表面粗糙;無銹工件可跳過此步驟。