其他常見類型
電泳類型 支持介質(zhì) / 形式 核心應(yīng)用場景
毛細管電泳(CE) 石英毛細管(內(nèi)徑 25-100μm) 微量樣品分析(如氨基酸、成分)、DNA 測序(快速)
紙電泳 濾紙 早期氨基酸、小分子肽分離(現(xiàn)已被 PAGE 替代)
等電聚焦電泳(IEF) 兩性電解質(zhì)凝膠 按蛋白質(zhì)等電點(pI) 分離,用于蛋白質(zhì) pI 測定、復(fù)雜樣品預(yù)分離
典型操作流程(以 SDS-PAGE 為例)
凝膠制備:根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)分子量配置凝膠(小分子用高濃度膠,如 15%;大分子用低濃度膠,如 8%),分為 “分離膠”(下層,起分離作用)和 “濃縮膠”(上層,使樣品濃縮成窄帶,提高分辨率)。
樣品處理:蛋白質(zhì)樣品與 SDS 上樣緩沖液(含 SDS、還原劑 β- 巰基乙醇、溴酚藍指示劑)混合,95℃加熱 5-10 分鐘,使蛋白質(zhì)變性并結(jié)合 SDS。
上樣與電泳:將處理好的樣品加入凝膠加樣孔,同時加入 “蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)品”(Marker),接通電源(濃縮膠用低電壓,分離膠用高電壓),溴酚藍指示劑遷移至凝膠底部時停止電泳。
檢測與分析:
染色:常用考馬斯亮藍染色(簡單快速,檢測限~0.1μg)或銀染(靈敏度高,檢測限~1ng);
成像與分析:通過凝膠成像儀拍攝條帶,結(jié)合 Marker 判斷目標(biāo)蛋白質(zhì)的分子量,通過條帶亮度半定量分析蛋白質(zhì)含量。
磷化處理
目的:在工件表面形成一層均勻致密的磷酸鹽結(jié)晶膜(厚度 1-5μm),增強電泳涂層的附著力和耐腐蝕性。
工藝:浸入磷化液(常用鋅系、錳系),溫度 30-45℃,時間 5-10 分鐘(噴淋磷化效率更高)。
關(guān)鍵:磷化膜應(yīng)呈灰色或淺灰色,結(jié)晶均勻,無露底、發(fā)花現(xiàn)象(通過檢測膜重:2-5g/m2)。
后處理階段(固化:形成終涂層性能)
通過高溫固化使?jié)衲そ宦?lián)成致密的干膜,賦予涂層硬度、耐腐蝕性等關(guān)鍵性能。
瀝干
操作:將工件懸掛瀝干表面水分,避免烘干時水分聚集導(dǎo)致涂層流掛。
烘干固化
核心:通過高溫使涂料中的樹脂、交聯(lián)劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng),形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。
關(guān)鍵參數(shù):
溫度:陰極電泳 160-180℃,陽極電泳 140-160℃(需根據(jù)涂料類型調(diào)整,誤差 ±5℃);
時間:20-40 分鐘(從工件達到設(shè)定溫度開始計時,確保完全固化)。
注意:升溫速率需控制(通常 5-10℃/min),避免涂層因急劇升溫產(chǎn)生氣泡。
冷卻
操作:工件從烘箱取出后自然冷卻至室溫(或強制風(fēng)冷),避免高溫下接觸灰塵。
檢驗與修整
檢測項目:
外觀:無針孔、流掛、色差、縮孔等缺陷;
性能:膜厚(20-50μm,用膜厚儀測量)、附著力(劃格法測試,需達 0 級或 1 級)、耐腐蝕性(鹽霧測試、耐沖擊性);
修整:輕微缺陷(如小顆粒)可打磨后補涂,嚴重缺陷需退膜返工。