典型操作流程（以 SDS-PAGE 為例）

凝膠制備：根據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)分子量配置凝膠（小分子用高濃度膠，如 15%；大分子用低濃度膠，如 8%），分為 “分離膠”（下層，起分離作用）和 “濃縮膠”（上層，使樣品濃縮成窄帶，提高分辨率）。

樣品處理：蛋白質(zhì)樣品與 SDS 上樣緩沖液（含 SDS、還原劑 β- 巰基乙醇、溴酚藍(lán)指示劑）混合，95℃加熱 5-10 分鐘，使蛋白質(zhì)變性并結(jié)合 SDS。

上樣與電泳：將處理好的樣品加入凝膠加樣孔，同時(shí)加入 “蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)品”（Marker），接通電源（濃縮膠用低電壓，分離膠用高電壓），溴酚藍(lán)指示劑遷移至凝膠底部時(shí)停止電泳。

檢測(cè)與分析：

染色：常用考馬斯亮藍(lán)染色（簡單快速，檢測(cè)限～0.1μg）或銀染（靈敏度高，檢測(cè)限～1ng）；

成像與分析：通過凝膠成像儀拍攝條帶，結(jié)合 Marker 判斷目標(biāo)蛋白質(zhì)的分子量，通過條帶亮度半定量分析蛋白質(zhì)含量。

技術(shù)優(yōu)勢(shì)與局限性

優(yōu)勢(shì)：

分辨率高：可區(qū)分結(jié)構(gòu) / 性質(zhì)極相似的物質(zhì)（如不同亞型的蛋白質(zhì)、僅差 1 個(gè)堿基的 DNA 片段）；

樣品用量少：僅需微克（μg）甚至納克（ng）級(jí)樣品；

操作靈活：可通過調(diào)整介質(zhì)、緩沖液、電場參數(shù)適配不同樣品。

局限性：

部分技術(shù)（如 PAGE）操作較繁瑣，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求高（如凝膠制備需避免氣泡）；

變性電泳（如 SDS-PAGE）會(huì)破壞生物活性，無法用于活性物質(zhì)純化；

大分子物質(zhì)（如基因組 DNA）分離效率較低，需結(jié)合脈沖場凝膠電泳（PFGE）等特殊技術(shù)。

總之，電泳是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室 “分離分析” 的基石，其技術(shù)發(fā)展（如與質(zhì)譜、色譜聯(lián)用）進(jìn)一步拓展了在醫(yī)學(xué)、組學(xué)研究等領(lǐng)域的應(yīng)用邊界。

預(yù)脫脂

目的：初步去除工件表面的大量油污、灰塵（尤其是機(jī)加工殘留的切削油、沖壓油）。

工藝：將工件浸入或噴淋堿性脫脂劑（含氫氧化鈉、碳酸鈉、表面活性劑等），溫度 50-60℃，時(shí)間 3-5 分鐘。

作用：減輕后續(xù)主脫脂的負(fù)擔(dān)，避免油污污染后續(xù)槽液。

后處理階段（固化：形成終涂層性能）

通過高溫固化使?jié)衲そ宦?lián)成致密的干膜，賦予涂層硬度、耐腐蝕性等關(guān)鍵性能。

瀝干

操作：將工件懸掛瀝干表面水分，避免烘干時(shí)水分聚集導(dǎo)致涂層流掛。

烘干固化

核心：通過高溫使涂料中的樹脂、交聯(lián)劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

關(guān)鍵參數(shù)：

溫度：陰極電泳 160-180℃，陽極電泳 140-160℃（需根據(jù)涂料類型調(diào)整，誤差 ±5℃）；

時(shí)間：20-40 分鐘（從工件達(dá)到設(shè)定溫度開始計(jì)時(shí)，確保完全固化）。

注意：升溫速率需控制（通常 5-10℃/min），避免涂層因急劇升溫產(chǎn)生氣泡。

冷卻

操作：工件從烘箱取出后自然冷卻至室溫（或強(qiáng)制風(fēng)冷），避免高溫下接觸灰塵。

檢驗(yàn)與修整

檢測(cè)項(xiàng)目：

外觀：無針孔、流掛、色差、縮孔等缺陷；

性能：膜厚（20-50μm，用膜厚儀測(cè)量）、附著力（劃格法測(cè)試，需達(dá) 0 級(jí)或 1 級(jí)）、耐腐蝕性（鹽霧測(cè)試、耐沖擊性）；

修整：輕微缺陷（如小顆粒）可打磨后補(bǔ)涂，嚴(yán)重缺陷需退膜返工。